Биологические аспекты паразитирования dirofilaria immitis у собак в астраханской области


Скачать 122,29 Kb.
PDF просмотр
НазваниеБиологические аспекты паразитирования dirofilaria immitis у собак в астраханской области
страница9/9
Богданова Татьяна Викторовна
Дата конвертации15.08.2012
Размер122,29 Kb.
ТипАвтореферат
СпециальностьПаразитология
Год2010
На соискание ученой степениКандидат биологических наук
1   2   3   4   5   6   7   8   9

 
21 
затем  тщательно  растирали  с  добавлением  кварцевого  песка  в  фарфоровой 
ступке  при  добавлении  небольшого  количества  физиологического  раствора    в 
течение  двух  часов  до  получения  однородной  массы.  Затем  полученную  сус-
пензию  подвергали  замораживанию  при  температуре  -  4ºС.  В  течение  после-
дующих трех суток суспензию извлекали из морозильной камеры и после неко-
торого  оттаивания  смесь  тщательно  растирали,  а  затем  повторно  подвергали 
замораживанию. Эту процедуру повторяли 3 раза.  
В полученную суспензию добавляли физиологический раствор из расчета 
1:3,  учитывая  первоначально  добавленное  количество  физиологического  рас-
твора при растирании гельминтов. После чего полученную смесь экстрагирова-
ли  путем  четырехчасового  встряхивания  на  шуттель-аппарате  при  комнатной 
температуре.  Далее  биомассу  центрифугировали  при  3000  оборотах/минуту  в 
течение 30 минут. Надосадочную жидкость (экстракт) сливали, а к осадку при-
бавляли 10 мл физиологического раствора и повторно центрифугировали  в те-
чение  30  минут  в  том  же  режиме.  Полученные  порции  экстрактов  соединяли.  
Полученный  экстракт  для  концентрирования  помещали  в  диализный  мешок. 
Содержание белка в данном экстракте составило – 15,2 г/л (15,2 ± 0,2 мг/мл) (Р 
< 0,01).   
Для установления микробиологической чистоты антигена перед введени-
ем его кроликам проводили посев на питательные среды. Общепринятым мето-
дом была установлена бактериологическая пригодность антигена, приготовлен-
ного  из  Dirofilaria  immitis  для  последующей  иммунизации  кроликов  с  целью 
получения антисывороток, необходимых для подтверждения чистоты получен-
ного нами диагностикума. 
Полный  цикл  иммунизации  кроликов  длился  12  суток.  На  подкожные  и 
внутримышечные инъекции израсходовано – 7,7 мл антиген-экстракта и, соот-
ветственно – 117,04 мг белка. 

 
22 
Спустя  30  дней  после  последней  инъекции,  продолжили  иммунизацию 
кроликов путем внутримышечных инъекций в различные участки бедер. 
На весь курс иммунизации было израсходовано 11,4 мл антиген-экстракта, 
что  составило  173,28  мг  белка.  Все  животные  опытной  и  контрольной  группы 
живы. 
Идентификацию антигенов проводили методом иммунодиффузии по Ух-
терлони.  Тем же способом  было подтверждено отсутствие возможной реакции 
с перекрестно реагирующими антигенами (сывороткой крови, тканями легких и 
сердечной мышцы инвазированных собак) при проведении исследования реко-
мендуемым  нами  методом.  В  связи  с  тем,  что  чувствительность  иммунодиф-
фузного метода не всегда может достаточно точно свидетельствовать об отсут-
ствии реакции идентичности или же частичной идентичности между антигена-
ми, следующим этапом, подтвердившим иммунологическую частоту и высокую 
специфичность нашего диагностикума, был иммуноэлектрофорез. 
Таким  образом,  в  результате  проведенных  испытаний,  получено  досто-
верное  подтверждение  высокой  иммунологической  частоты  (отсутствие  пере-
крестно реагирующих антител, проверенной в два этапа – иммунодиффузией по 
Ухтерлони, а затем, с использованием иммуноэлектрофореза) и эффективности 
предлагаемого нами метода. Только его достоверно подтвержденная иммуноло-
гическая чистота позволила нам рекомендовать его к широкому применению.  
Для проведения дальнейшей апробации метода «Способ определения за-
раженности собак D. immitis» нами была выбрана группа животных, спонтанно 
зараженных дирофиляриозом (D. immitis), выявленных по клиническому осмот-
ру, аускультации. При выборе контрольных групп животных учитывали породу 
и возраст. Возраст животных составил - от 7 до 13 лет. Всех собак разбили на 
группы  по  породам.  Перед  началом  эксперимента  у  всех  животных  взяли  ве-
нозную  кровь  и  исследовали  на  наличие  микрофилярий  D.  immitis  по  модифи-
цированному методу Кнотта.  

 
23 
У всех животных параллельно вышеописанным исследованиям получали 
венозную кровь и приготовляли сыворотки путем отстаивания и удаления сгу-
стков. Сыворотки хранили в холодильнике при температуре +2…+4ºС. 
Далее проводили постановку реакции преципитации в агаровом геле, со-
гласно  методике  «Способ  определения  зараженности  собак  D.  immitis».  Ранее 
приготовленный антиген из Dirofilaria immitis и сыворотки крови наблюдаемых 
собак вносили в вырезанные пробойником лунки агара, по следующей схеме: в 
центральную лунку вносили антиген, по периферии помещали сыворотки собак 
опытной группы. 
Проведенная  апробация  метода  в  опытной  и  контрольной  группах  собак 
доказала  его  высокую  специфичность  и  достоверность.  В  опытной  группе  эф-
фективность предлагаемого нами метода составила – 98%, в контрольной груп-
пе  –  100%.  Экспериментальным  путем  была  доказана  высокая  чувствитель-
ность и специфичность (98% и 97% соответственно) предлагаемого нами мето-
да. 
 
ВЫВОДЫ 
1.  При  исследовании  собак  и  кошек  г.  Астрахани  выявлено  восприимчивое 
поголовье дефинитивных хозяев Dirofilaria immitis: наиболее подвержены 
опасности заражения цепные собаки служебных пород, из-за длительного 
пребывания их вне помещений и более частого контакта с комарами. 
2.  По результатам исследований морфологии микрофилярий выявлено пара-
зитирование  у  собак  в  Астраханской  области  -  D.immitis.  Максимальная 
микрофиляремия (ЭИ – 23,5%) наблюдалась у собак в августе-сентябре. 
3.  Микрофилярии обнаружили у собак 4-х служебных пород и беспородных, 
чаще инвазию регистрировали у кавказских и немецких овчарок и беспо-
родных.  У  декоративных  пород  инвазию  не  регистрировали.  Значитель-

 
24 
ное  влияние  на  зараженность  оказывал  тип  содержания  животных  и  хо-
зяйственное назначение (бездомные и цепные). 
4.  Установлено,  что  чаще  подвержены  инвазии  кобели,  чем  суки.  Зараже-
нию подвержены собаки всех  возрастов, наибольшее количество инвази-
рованных  в  возрастном  отрезке  –  от  7  до  10  лет  (30±1,0%),  возрастной 
минимум приходится на 1,5-3 года (1,0%). 
5.  Среди  промежуточных  хозяев  –  комаров,  наиболее  инвазированы  личин-
ками  дирофилярий  (D.  immitis)  комары  рода  Culex  (8,6%),  менее    рода 
Aedes (5,8%) и Anopheles (4,5%). 
6.  Результаты  гельминтологических  вскрытий  подтвердили  паразитирова-
ние  у  собак  D.  immitis.  Летальность  собак  от  дирофиляриоза  (D.  immitis
наибольшая  среди  немецких  и  восточноевропейских  овчарок,  81%  всех 
летальных  случаев  приходится  на  зиму  (декабрь  -  10%,  январь  –  22,6%, 
февраль – 48%), осенью гибель животных не зарегистрирована. 
7.  Разработан и апробирован унифицированный метод диагностики «Способ 
определения  зараженности  собак  Dirofilaria  immitis»,  основанный  на  ре-
акции  преципитации  специфичного  антигена  и  сыворотки  крови  собак  в 
агаровом геле, который отличается высокой чувствительностью и специ-
фичностью  (98%  и  97%  соответственно)  и  имеет  ряд  преимуществ:  по-
зволяет проводить массовые исследования крови собак и выявлять инва-
зию на любой стадии болезни. 
 
 
 
 
 
 
 

 
25 
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 
 
Исходя из результатов наших исследований по изучению дирофиляриоза 
(D. immitis) собак в условиях Астраханской области для своевременной диагно-
стики и усовершенствования мер борьбы с данной инвазией рекомендуем про-
водить следующие мероприятия: 
1. 
Не реже одного раза в год в августе проводить обследование всех жи-
вотных на наличие микрофилярий  D. immitis, а также обследовать всех ввози-
мых на территорию области собак. 
2. 
При  подозрении  на  дирофиляриоз  (D.  immitis),  необходимо  принимать 
во внимание  – возраст животного, породу, пол, сезон года и особенно способ 
содержания. 
3. 
Для установления достаточно точного диагноза рекомендуется исполь-
зовать разработанный «Способ определения зараженности собак Dirofilaria im-
mitis»  -  ввиду  его  специфичности  к  определенному  виду  Dirofilaria,  достовер-
ности и надежности, а также финансовой доступности.   
 
 
Список работ, опубликованных по теме диссертации.  
 
1. Богданова Т.В. Дирофиляриоз собак в Астраханской области  / Бойко О.В. 
//Журнал «Вестник АГТУ». – №4(39). - Астрахань, 2007. – С.137-139. 
2. Богданова  Т.В.  Иммунологическая  диагностика  дирофиляриоза  собак  / 
Бойко В.И. // Российский иммунологический журнал. – Т.2(11), №2-3. – Москва, 
2008. – С.164. 
3. Богданова Т.В. Диагностика паразитирования D. immitis у собак в Астра-
ханской области //Журнал «Ветеринарная практика».- № 4 (43). – С-Петербург, 
2008. –С.24-26. 

 
26 
4. Богданова  Т.В.  Диагностическое  использование  антигена,  приготовлен-
ного  из    D.  immitis  /  Бойко  В.И.//  Журнал  «Клиническая  лабораторная  диагно-
стика» . - №9. – Москва, 2008. –С.52-53. 
5.  Богданова Т.В. Ветеринарный контроль за паразитозами собак и кошек в 
г.  Астрахани  /  Полковниченко  А.П.  //  Материалы  II  Всеросс.  научной  конфе-
ренции студентов и молодых ученых с межд. участием: «Актуальные проблемы 
современных аграрных технологий». – Астрахань,  2007. - С.199-200. 
6. Богданова  Т.В.  Дирофиляриоз  плотоядных  в  условиях  Астраханской  об-
ласти /Полковниченко  А.П.// Материалы международной научно-практической 
конференции:  «Проблемы  ресурсодобывающего  производства  и  переработки 
экологически чистой с/х. продукции». - Астрахань, 2006 – С.77-78. 
7. Богданова  Т.В.  Лабораторная  диагностика  и  лечение  дирофиляриоза  со-
бак  /  Полковниченко  А.П.//  Материалы  межд.  научно-практической  конферен-
ции: «Проблемы ресурсодобывающего производства и переработки экологиче-
ски чистой с/х продукции». - Астрахань, 2006 – С.82-83. 
8.  Богданова Т.В. Некоторые актуальные проблемы ветеринарной паразито-
логии  в  Астраханской  области  /  Бойко  О.В.//  Материалы  Российской  научной 
конференции  студентов  и  молодых  ученых  с  межд.  участием:  «Актуальные 
проблемы современных аграрных технологий». – Астрахань, 2006. - С.111-112. 
9. Богданова  Т.В.  Климато-географические  особенности  Астраханской  об-
ласти как приоритетный фактор распространения дирофиляриоза / Бойко О.В.// 
Materialy V miedzynarodowej naukowi-praktycznej konferencji “Aktualne problemy 
nowoczesnych  nauk-2009”.  -  Volume  18. -  Przemysl,  Nauka  I  studia,  2009.  –  Р.45-
46. 
10. 
Богданова  Т.В.  Эпизоотологический  мониторинг  дирофиляриоза  в 
Астраханской  области  //  Materialy  V  miedzynarodowej  naukowi-praktycznej 
konferencji  “Aktualne  problemy  nowoczesnych  nauk-2009”.  -  Volume  18.  - 
Przemysl, Nauka I studia, 2009. – Р. 47-48. 

 
27 
11. 
Богданова  Т.В.Иммунологический метод диагностики инвазии, вы-
зываемой D.  immitis/Бойко О.В., Бойко  В.И.//Труды  научно-практической кон-
ференции «Лабораторная медицина в свете Концепции развития здравоохране-
ния России до 2020 года». – Москва, 28-30 сентября 2009. – С.220-221. 
 

1   2   3   4   5   6   7   8   9

Разместите кнопку на своём сайте:
поделись


База данных защищена авторским правом ©dis.podelise.ru 2012
обратиться к администрации
АвтоРефераты
Главная страница