Фитохимическое исследование сырья и препаратов перца однолетнего ( с apsicum annuum L.)




НазваниеФитохимическое исследование сырья и препаратов перца однолетнего ( с apsicum annuum L.)
страница2/3
Сулейманова Лилия Ривхатовна
Дата конвертации17.08.2012
Размер258 Kb.
ТипАвтореферат
СпециальностьФармацевтическая химия, фармакогнозия
Год2011
На соискание ученой степениКандидат фармацевтических наук
1   2   3








1







1 2




Рис. 4. Фрагмент продольного среза наружной поверхности чашелистика плода перца стручкового (× 400)

Обозначение: 1 – устьице.

Рис. 5. Фрагмент продольного среза внутренней поверхности чашелистика плода перца стручкового (× 400)

Обозначения: 1 – многоклеточная головка; 2 – одноклеточная ножка.





1









Рис. 6. Фрагмент продольного среза плодоножки плодов (×400)

Обозначение: 1 – механические клеки.

Рис. 7. Фрагмент эпидермальных клеток семени перца; реакция с сернокислым анилином (× 100)


2. Фитохимическое исследование лекарственного растительного сырья и настойки перца стручкового

В результате изучения химического состава плодов перца стручкового (Краснодарский край, Самарская область: г. Сызрань, г. Безенчук) и ЛФ «Перца стручкового настойка» (ОАО «Тверская фармацевтическая фабрика», ООО «Гиппократ», ООО «Бэгриф») выделены 6 индивидуальных соединений, в том числе капсаицин – доминирующий и диагностический алкалоид. Впервые для рода Capsicum L. было выявлено производное фталевой кислоты – диоктилфталат и впервые был выделен из плодов перца стручкового космосиин, представляющий собой 7-О-β-О-глюкопиранозид апигенина (5,7,41–тригидроксифлавон). Кроме того, из плодов перца были выделены апигенин, рутин и β-каротин.

Препаративное разделение веществ осуществляли с помощью метода колоночной хроматографии. Для элюирования использовали смеси растворителей, а именно: хлороформ-спирт в различных соотношениях. Эффективное разделение и отчистка веществ достигалась чередованием сорбентов (алюминия оксид (II нейтральный по Брокману), силикагель, L40/100 и полиамид). Для контроля отсутствия примесей в полученных соединениях использовали метод ТСХ.

Для установления структуры выделенных веществ использованы данные УФ-, ИК-, 1Н-ЯМР, ¹³С-ЯМР и масс-спектров, а также фрагменты структурных исследований выделенных соединений представлены на рисунках 8 и 9.



Рис. 8. 1Н -ЯМР-спектр капсаицина в СDCl3



Рис. 9. ЯМР-спектр диоктилфталата СDCl3

2.1. Физико-химические и спектральные характеристики основных выделенных веществ

Капсаицин (1). Сиропообразное вещество светло-желтого цвета, состава С18Н273. Масс-спектр (70 eV, 200 оС, m/z, %): М+ 305 (30). УФ-спектр (EtOH, max, нм): 230, 280.

1H-ЯМР-спектр (CDCl3, δ, м.д., J/Гц): 0.88 (3H, д, J = 6.0, 3Н-17), 0.96 (6H, д, J = 6.0 , 3H-18), 1.12-1.70 (4H, м, 2Н-11, 2Н-12), 1.90-2.10 (2H, м, 2H-13), 2.20 (2H, т, J = 7.5, 2Н-10), 2.30-2.40(1H, м, Н-16), 3.88(3H, с, OCH3), 4.37 (2H, д, J = 5.5, 2Н-7), 5.35(2H, м, 14, 15-H), 5.65(2H, уш. с, NH, OH), 6.75 (1H, дд, J = 7.5 и J =2.0, H-6), 6.82 (1H, д, J = 2.0, H-2), 6.87(1H, д, J = 7.5, H-5) .

13C-ЯМР-спектр (CDCl3, м.д.): 22.71(C-17), 22.73 (C-18), 25.36 (C-11), 29.52 (C-12), 31.05 (C-16), 32.30 (C-13), 36.86 (C-10), 43.64 (C-7), 56.04 (ОСН3), 110.80 (C-2), 114.46 (C-5), 120.92 (C-6), 126.57 (C-14), 130.52 (C-1), 138.20 (C-15), 145.24 (C-4), 146.80 (C-3), 172.90 (C-9).

ИК-спектр (см-1): 3320 (OH), 2960 (CH), 1626 (C=O), 1595 (ароматические связи).

Диоктилфталат (2). Бесцветное сиропообразное вещество, состава С24Н30О4. ИК-спектр (см-1): 1725 (C=O сложноэфирной связи), 1595 (ароматические связи). УФ-спектр (EtOH, max, нм): 231, 281.

1H-ЯМР-спектр (CDCl3, δ, м.д., J/Гц): 0.90 (6H, д, J = 6.0, 2СН3), 1.2-1.75 (24H, м, 12СН2-), 4.15-4.30 (4H, м, 2СН2-О-), 7.50-7.75 (4H, м, J = 2.0, ароматические протоны: H-3, H-4, H-5, H-6).

Космосиин (3). 1Н-ЯМР-спектр 7-О-β-О-глюкопиранозид апигенина: +NаоАс, 269, 378; +AlCl3, 279, 330, 347, 384; Cпектр 1Н-ЯМР (300 МГц, (CD3)2CO, δ, м.д., J/Гц): 3.25-4.0 (6Н глюкозы), 5.16 (1Н, д, J = 7,2, Н-111 глюкопиранозы), 6.45 (1Н, д, J = 2.5, Н-6), 6.81 (1H, д, J = 2.5, Н-8), 6.91 (1H, c, Н-3), 7.02 (2H, д, J =9, Н-31 и Н-51 - 2Н), 7.95 (2Н, д, J = 9, Н-21 и Н-61), 12.50 (1H, c, 5-ОН группы).

Соединения 1-6, выделенные в ходе проведения фитохимического исследования ЛРС плодов перца стручкового и промышленных образцов настойки этого растения, представлены в таблице 1.


Таблица 1

Физико-химические константы соединений,

выделенных из плодов перца стручкового



Название / Структурная формула

Физико-химические

константы

1.

Капсаицин



С18Н27NO3

Т.пл. 62-65 оС (вода)

max(EtOH), нм

230, 280

2.

Диоктилфталат



С6Н4(СООС10Н17)2

Сиропообразное вещество

max(EtOH), нм

231, 281

3.

Космосиин



С21Н20О10

T.пл. 224-227º

max(EtOH), нм

270, 333


4.

Апигенин



С15Н10О5

T.пл. 338-342º

max(EtOH), нм

270, 333


5.

Рутин



С27Н30О16

T.пл. 191-193º

max(EtOH), нм

258, 267, 362


6.

β-каротин



С40Н56

max (EtOH), нм

425, 456, 475

3. Совершенствование методов стандартизации плодов перца стручкового

Современные тенденции развития методов стандартизации ЛП служат предпосылкой для формирования новых фармакопейных требований как к их качеству, так и к качеству ЛРС, на основе которых они изготовлены.

В соответствии с ОСТом 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств», в проекты ФС «Перца стручкового плоды» внесены: раздел «Спецификация лекарственного растительного сырья», иллюстрации в раздел «Микроскопия» фотографии микропрепаратов поперечного и продольного срезов плодов и семян перца однолетнего, в разделы «Подлинность», «Качественные реакции» и «Количественное определение» введены новые методики качественного и количественного анализа сырья и настойки перца стручкового.

3.1. Качественный анализ сырья перца стручкового

Для определения подлинности сырья перца стручкового предложено сочетание современных методов тонкослойной хроматографии и УФ-спектроскопии.

Установлено, что для получения объективных результатов необходима очистка извлечений из плодов перца однолетнего на колонке с оксидом алюминия, чтобы исключить вклад других веществ, поглощающих в ультрафиолетовой области спектра (рис. 10).



Рис. 10. УФ-спектр раствора извлечения плодов перца стручкового (1) и раствора извлечения, очищенного на Al2O3 (2)


Оценку подлинности сырья предложено также проводить с использованием ГСО капсаицина, причём с учётом фенольной природы данного алкалоида. УФ-спектр водно-спиртового извлечения плодов перца стручкового имеет 2 максимума поглощения при 230 и 280 нм, что сопоставимо с таковым спиртового раствора ГСО капсаицина (рис. 11). Принимая во внимание данное обстоятельство, нами предложено использовать УФ-спектроскопию для определения подлинности исследуемого сырья.



Рис.11. УФ–спектр раствора ГСО капсаицина


При просмотре хроматограммы в УФ-свете при длине волны 254 нм обнаруживаются пятна с фиолетовой флуоресценцией, в том числе на уровне пятна ГСО капсаицина (величина Rf~0,6) (рис. 12 А).


А






Б




Рис. 12. Схема хроматограммы извлечений плодов перца однолетнего («Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ», система растворителей: хлороформ – этиловый спирт (19:1): А – детекция в УФ-свете при 254 нм; Б – проявление раствором ДСК

Обозначения:

1. Извлечение на 90% спирте этиловом из плодов стручкового перца.

2. Извлечение на 90% спирте этиловом из плодов стручкового перца, очищенное на Al2O3.

3. Раствор Государственного стандартного образца капсаицина.



При проявлении диазобензолсульфокислотой в насыщенном растворе карбоната настрия (ДСК) хроматографические пластинки нагревали при температуре 100-105 С в течение 2-3 мин в сушильном шкафу. В результате обнаруживалось доминирующее пятно красновато-малинового цвета с величиной Rf~0,6 (на уровне аналогичного пятна ГСО капсаицина), что свидетельствует о фенольной природе алкалоида (капсаицин) (рис. 12 Б).


3.2. Количественный анализ сырья перца стручкового

В основу анализа БАC в плодах перца стручкового положены методики количественного спектрофотометрического определения суммы капсаициноидов в пересчете на капсаицин.

3.2.1. Хроматоспектрофотометрия

Результаты исследования УФ-спектров («Specord 40», «Analytik Jena») (рис. 10 и 11) свидетельствуют о том, что для количественного определения суммы капсаициноидов целесообразно использовать метод хроматоспектрофотометрии при аналитической длине волны 280 нм. При этом нами было предложено использовать в методике анализа ГСО капсаицина. Оптимальными условиями экстракции являются: время экстракции — 30 мин, экстрагент - 90% спирт этиловый, соотношение «сырьё - экстрагент» —1:20.

Анализ серии образцов сырья, проведенных с использованием спектофотометрической методики, показывает, что содержание суммы капсаициноидов в ЛРС варьирует от 0,43% до 0,6%, а не 0,15%, который даётся в НД «Перца стручкового плоды» (ГОСТ 14260-89). Следовательно, в качестве нижнего предела целесообразно рекомендовать показатель «не менее 0,4%», вместо значения «не менее 0,15%».

Метрологические характеристики спектрофотометрической методики количественного определения суммы капсаициноидов в пересчете на капсаицин в ЛРС представлены в табл. 2.

Результаты анализа, обработанные статистически (n=11, Р=0,95), свидетельствуют о том, что ошибка единичного определения суммы капсаициноидов в пересчете на капсаицин с доверительной вероятностью 95% в плодах перца стручкового составляет ±4,73%.

Опыты с добавками ГСО капсаицина в извлечение из сырья перца свидетельствуют об отсутствии систематической ошибки разработанной методики.


Таблица 2

Метрологические характеристики спектрофотометрической методики количественного определения суммы капсаициноидов в пересчёте на капсаицин (Р=95, t табл =2,23, n=11)


f



S

P, %

t (P,f)

X

E, %

10

0,58

0,0121

95

2,23

0,027

4,73


4. Совершенствование методов стандартизации препарата «Перца стручкового настойка»

При разработке подходов к решению проблем стандартизации препарата «Перца стручкового настойка» мы придерживались принципа унификации методик анализа в ряду лекарственное растительное сырьё – субстанция – лекарственная форма (Самылина И.А. и др., 1994).

Для качественного анализа препарата данного растения, как и в случае сырья, предложен метод ТСХ с использованием ГСО капсаицина, а также идентификация по параметрам УФ-спектра.

При проявлении хроматограммы щелочным раствором ДСК, как и в случае сырья, обнаруживается доминирующее пятно красновато-малинового цвета с величиной Rf~0,6 (на уровне аналогичного пятна ГСО капсаицина), что свидетельствует о фенольной природе алкалоида (капсаицин).

1   2   3

Разместите кнопку на своём сайте:
поделись


База данных защищена авторским правом ©dis.podelise.ru 2012
обратиться к администрации
АвтоРефераты
Главная страница