Клинико-патогенетическое значение исследования активности энзимов гуаниловой ветви пуринового метаболизма в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ревматоидным артритом


НазваниеКлинико-патогенетическое значение исследования активности энзимов гуаниловой ветви пуринового метаболизма в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ревматоидным артритом
страница1/4
КУКУШКИНА Елена Владимировна
Дата конвертации01.09.2012
Размер0,55 Mb.
ТипАвтореферат
СпециальностьРевматология
Год2010
На соискание ученой степениКандидат медицинских наук
  1   2   3   4


На правах рукописи


КУКУШКИНА Елена Владимировна




КЛИНИКО-ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
ИССЛЕДОВАНИЯ АКТИВНОСТИ ЭНЗИМОВ ГУАНИЛОВОЙ ВЕТВИ ПУРИНОВОГО МЕТАБОЛИЗМА В ЛИЗАТАХ ЛИМФОЦИТОВ, ЭРИТРОЦИТОВ И ПЛАЗМЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ


14.01.22 – ревматология




Автореферат диссертации на соискание ученой степени


кандидата медицинских наук


Волгоград – 2010


Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук «НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН» и ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ, Центре реабилитации Управления делами Президента РФ



Научный руководитель:


член-корреспондент РАМН, доктор

медицинских наук, профессор

РОМАНОВ Александр Иванович


Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

Куличенко Людмила Леонидовна

Волгоградский государственный

медицинский университет





доктор медицинских наук

Александров Андрей Вячеславович

НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН


Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия»


Защита состоится  2010 г. в ____ часов на заседании диссертационного совета Д 208.008.02 в ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ (400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1).


С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ.


Автореферат разослан  ____  ______________ 2010 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 208.008.02

доктор медицинских наук, профессор А.Р. Бабаева


ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Болезни костно-мышечной системы, типичным представителем которых является ревматоидный артрит (РА), составляют до 15% всех хронических заболеваний, регистрируемых в России. Причем, за последние 10 лет отмечается рост числа заболеваний опорно-двигательного аппарата на 40% (Н.В. Чичасова и др., 2004;
Е.Л. Насонов и др., 2005). РА занимает особое место среди других ревматических болезней суставов, и, хотя его распространенность (от 0,5 до 1,5%) относительно небольшая, он считается одним из самых тяжелых заболеваний суставов. Медико-социальная значимость РА обусловлена его неуклонно прогрессирующим течением, быстро приводящим к нарушению функций суставов, их анкилозированию, значительному ухудшению качества жизни, длительной и стойкой потере трудоспособности, ранней инвалидизации, выраженными экономическими затратами на лечение как со стороны государства, так и самих больных, сокращением продолжительности жизни на 5-10 лет, что делает борьбу с РА актуальной медико-социальной проблемой.

Борьба с РА осложняется неясностью многих аспектов этиопатогенеза заболевания. Нередко возникают сложности в распознавании активности ревматоидного процесса даже у больных с достоверным диагнозом РА, часто приобретающего хроническое, субклиническое течение с нормальными параклиническими показателями, что приводит к несвоевременной и неадекватной терапии. Нередко затруднительной бывает и дифференциальная диагностика РА с другими заболеваниями суставов, протекающими атипично: остеоартроз (ОА), подагра и др., что делает эту проблему достаточно актуальной.

Участие иммунных механизмов в патогенезе РА не вызывает сомнений (Е.Л. Насонов, 2009), но, в то же время, используемые в лечении больных РА различные иммуномодуляторы часто не достигают желаемого эффекта. Не исключено, что это может быть связано с тем, что иммунные нарушения являются не единственным патогенетическим механизмом РА, или иммунные дефекты являются не первопричиной, а следствием каких-то других процессов, инициирующих иммунную дисрегуляцию.

В основе нарушений регуляции иммунных процессов лежат функциональные расстройства иммунокомпетентных клеток — лимфоцитов, метаболизм которых при РА изучен недостаточно. В то же время хорошо известно, что некоторые пуриновые метаболиты (гуанозин, аденозин) играют важную роль в метаболизме лимфоцитов, их созревании, пролиферации, дифференциации, и, следовательно, могут иметь прямое отношение к иммунорегуляторным процессам (Р.Т. Тогузов и др., 1986; Ю.В. Тихонов и др., 1997). Содержание пуриновых нуклеозидов в лимфоцитах регулируется соответствующими ферментами, и по их активности можно судить о концентрации пуриновых метаболитов в клетках. Поэтому изучение активности энзимов пуринового метаболизма (ПМ), влияющих на функции лимфоцитов, представляется нам актуальным и перспективным направлением, способствующим пониманию отдельных звеньев патогенеза РА с иммуно-биохимических позиций. Кроме того, ферменты являются весьма чувствительными индикаторами воспалительных процессов, имеющих место при заболеваниях суставов. Исходя из этого, в нашей работе были изучены активности четырех энзимов гуаниловой ветви ПМ: гуаниндезаминазы (ГДА), гуанозиндезаминазы (ГЗДА), пуриннуклеозидфосфорилазы (ПНФ) и гуанозинфосфорилазы (ГФ) в трех биологических средах: лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови. Выбор этих ферментов обусловлен их важной ролью в метаболизме пуринов.

Цель исследования. Повышение качества диагностики активности ревматоидного процесса, выявление особенностей ферментов гуаниловой ветви пуринового метаболизма в лимфоцитах, эритроцитах и плазме крови больных РА с патогенетических позиций и в сравнительном аспекте с больными ОА и подагрой, изучение возможности использования показателей активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ для оценки эффективности проводимой терапии больных РА.

Задачи исследования.

  1. Изучить активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови практически здоровых людей в зависимости от пола и возраста, установить референтные пределы активности энзимов, изучить корреляционные связи между активностью энзимов в различных биологических средах.

  2. Изучить активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в трех биологических средах (лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови) у больных РА в процессе стационарного лечения: при поступлении, через 8-10 дней лечения, перед выпиской из стационара и оценить возможность использования энзимных показателей в объективизации оценки эффективности проводимой терапии больных РА.

  3. Изучить активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в трех биологических средах у больных РА в зависимости от степени активности патологического процесса, клинико-анатомических форм, характера течения, стадии поражений суставов, их функционального класса (ФК), наличия или отсутствия ревматоидного фактора (РФ).

  4. Изучить корреляционные связи между активностью энзимов в различных биологических средах у больных РА с различной активностью патологического процесса.

  5. Оценить информативность энзимных показателей крови в индикации минимальной активности ревматоидного процесса в сравнении с общепринятыми острофазовыми клинико-иммуно-биохимическими показателями, используемыми для выявления активности процесса: СОЭ, СРБ, сиаловые кислоты, гамма-глобулины и др.

  6. Изучить активность ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови у больных контрольной группы: ОА и подагрой и провести сравнительные исследования энзимных показателей крови у больных РА с больными ОА и подагрой и отобрать наиболее информативные энзимные показатели, способствующие дифференциации этих трех заболеваний.

Научная новизна исследования. Впервые у больных РА в трех биологических средах: лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови были проведены исследования активности четырех ферментов гуаниловой ветви ПМ: ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ и проведен анализ зависимости активности этих энзимов от степени активности процесса, характера течения, клинико-анатомических форм, стадии поражения суставов, наличия РФ, ФК суставов и оценено влияние этих клинических факторов на своеобразие энзимного профиля крови. Доказано, что наибольшее влияние на энзимные показатели крови оказывает выраженность активности ревматоидного процесса. Показана более высокая чувствительность и информативность показателей активности ПНФ в эритроцитах, ГДА, ПНФ и ГФ в лимфоцитах в отражении минимальной активности ревматоидного процесса, по сравнению с общепринятыми острофазовыми лабораторными показателями (СОЭ, СРБ и др.). Установлено, что отдельные энзимные показатели крови способствуют дифференциации РА, ОА и подагры. Показано, что выявленные изменения активности энзимов в лимфоцитах способны вызвать нарушения функциональных свойств лимфоцитов и обусловить дискоординацию иммунных процессов при РА. Установлено, что энзимные показатели крови в комплексе с клиническими данными способствуют объективизации контроля эффективности проводимой терапии больных РА.

Практическая значимость. Исследования активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови у больных РА в комплексе с клиническими данными способствуют выявлению минимальных проявлений активности патологического процесса и назначению своевременной адекватной терапии, а также уточнению степени активности патологического процесса, характера течения заболевания и объективизации оценки эффективности проводимой терапии. Исследования активности вышеуказанных энзимов в трех биологических средах в комплексе с клиническими данными могут оказать существенную помощь при дифференциации РА, ОА и подагры.

Внедрение в практику. Методы определения активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови с целью уточнения степени активности ревматоидного процесса и дифференциации РА, ОА и подагры внедрены в практику работы муниципального учреждения здравоохранения «Городская клиническая больница
№ 25» г. Волгограда. С результатами проведенных энзимных исследований, возможностями энзимной диагностики в ревматологии, их перспективой систематически знакомятся студенты Волгоградского государственного медицинского университета, аспиранты, клинические ординаторы, практические врачи на семинарах, научно-практических и клинических конференциях.

Основные положения, выносимые на защиту. Показатели активности ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови у больных РА в комплексе с клиническими данными способствуют выявлению минимальной активности ревматоидного процесса, уточнению степени активности, характера течения, объективизации оценки эффективности проводимой терапии, дифференциации РА, ОА и подагры.

Публикации и апробация работы. Основные положения диссертации опубликованы в 9 печатных работах. Материалы диссертации докладывались в 2008-2009 гг. на научно-практических конференциях Волгоградского государственного медицинского университета, НИИ клинической и экспериментальной ревматологии РАМН.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 236 страницах текста (шрифт гарнитуры Times New Roman кегля 14 пт с полуторным интерлиньяжем) и состоит из введения, части I — обзора литературы, представленного одной главой, содержащей основные сведения о медико-биологическом значении пуринового метаболизма и его отдельных ферментов; части II — собственных исследований, состоящей из 5 глав, включающих клиническую характеристику больных, методы исследований, результаты проведенных исследований, их обсуждение, выводы, практические рекомендации. Диссертация иллюстрирована 70 таблицами, 15 рисунками, 3 выписками из историй болезни. Библиографический указатель содержит 236 источников, из которых 97 отечественных и 139 зарубежных.


МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Под наблюдением в условиях стационара находились 114 больных, из которых 80 больных РА, 18 — ОА и 16 больных подагрой. Среди больных РА было 57 (71,3%) женщин и 23 (28,7%) мужчины. Средний возраст больных РА — 42,5±0,9 лет, продолжительность заболевания — 8,50,3 лет. Диагностика РА осуществлялась в ходе всестороннего клинического обследования с использованием диагностических критериев Американской ревматологической ассоциации (АРА) (F. Arnett et al., 1988) и уточнялась в процессе лечения. Инструментальные (рентгенография, УЗИ, ЭКГ), лабораторные (общий анализ крови, мочи, СОЭ, СРБ, РФ, сиаловые кислоты и др.) методы исследований использовались в качестве дополнительных. Степень активности ревматоидного процесса определялась в соответствии с диагностическими критериями АРА, рабочей классификацией, индексом DAS28 (В.А. Насонова и др., 1997; J. Smolen et al., 2003), на основании которых I (минимальная) степень установлена у 16 (20%), II (умеренная) — у 50 (62,5%) и III (высокая) степень — у 14 (17,5%) больных. Медленно прогрессирующее течение (МПТ) определялось у 52 (65%) больных, быстро прогрессирующее течение (БПТ) — у 28 (35%) больных, серопозитивная форма — у 61 (76,3%), преимущественно суставная форма — у 53 (66,3%), внесуставные поражения — у 27 (33,8%) больных. У всех наблюдаемых больных РА определялись ограничения функциональных возможностей суставов: у 35 (43,8%) больных — ФК-2, у 38 (47,5%) — ФК-3 и у 7 (8,8%) — ФК-4. На основании рентгенологических исследований суставов (по Штейнброкеру) I стадия поражения суставов определялась у 8 (10%) больных, II стадия — у 41 (51,3%), III стадия — у 24 (30%) и IV стадия — у 7 (8,8%) больных. Из внесуставных поражений наиболее часто отмечалась патология мышц (31,3%), сердца (27,5%), желудочно-кишечного тракта (26,3%), легких (22,5%), почек (13,8%) и преобладали комбинированные поражения органов и тканей. Контрольная группа была представлена 30 практически здоровыми людьми (доноры станции переливания крови). Группы сравнения составили 18 больных ОА и 16 больных подагрой. Среди больных ОА были 5 (27,8%) мужчин и 13 (72,2%) женщин. Средний возраст больных ОА — 52,60,85 лет, длительность заболевания — 9,670,43 лет. У всех больных отмечались явления синовита. Больные подагрой были представлены только мужчинами. Средний возраст — 46,21,05 лет, длительность болезни — 6,880,48 лет. Хроническая форма болезни наблюдалась у 9 (56,3%) больных, интермиттирующая (межприступная) — у 7 (43,7%) больных, легкое течение — у 6 (37,5%), средней тяжести — у 10 (62,5%) больных, тофусные отложения — у 7 (43,7%) больных. Явления артрита отмечались у всех больных подагрой.

Выделение лимфоцитов и эритроцитов из венозной крови проводилось по методу Böyum (1980) с использованием лимфосепа (Lympho separation mudium) фирмы "JCN Biomedical" с градиентом плотности 1,077-1,079 г/мл. Количество клеток крови подсчитывалось под микроскопом. Лизаты клеток готовили путем замораживания, оттаивания, центрифугирования. Активность ГДА и ГЗДА определялась фенолгипохлоритным методом (W. Caraway, 1966), ГФ — по приросту содержания гуанина
(M. Yamada et al., 1989) и ПНФ — кинетическим методом (B. Robertson et al., 1973). Активность энзимов в лизатах клеток рассчитывалась в лимфоцитах на 1 мл, содержащий (до лизиса) 1×107 клеток, в эритроцитах —1109 клеток (для ГДА, ГЗДА и ГФ) и 1×108 клеток (для ПНФ) и выражалась в нмоль/мин/мл.

Статистическая обработка данных проводилась с использованием программных пакетов «STATISTIKA 6.0». Для каждой исследуемой группы больных вычислялись следующие выборочные характеристики распределения: средняя арифметическая (М), ошибка средней арифметической (m), среднее квадратическое отклонение (), медиана, интерквартильный размах (25%-75%), что зависело от нормальности вариационных рядов, использовались параметрические и непараметрические методы. Для сравнения двух зависимых групп по одному признаку использовался непараметрический критерий Вилкоксона, двух независимых групп — критерий Манна-Уитни. Сравнение трех и более независимых групп проводилось по методу ANOVA по Краскелу-Уолису. Анализ взаимосвязи признаков проводился с использованием метода Пирсона. Результаты считались достоверными при величинах достигнутого уровня значимости менее 0,05.

Для вычисления индекса DAS28(3) использовалась формула: 0,56   (ЧБС28) + 0,28  (ЧПС28) + 0,7  ln(СОЭ)  1,08 + 0,16.

Активность заболевания расценивается как низкая (DAS28  3,2), умеренная (DAS28  3,2 –  5,1) и высокая (DAS28  5,1).

  1   2   3   4

Разместите кнопку на своём сайте:
поделись


База данных защищена авторским правом ©dis.podelise.ru 2012
обратиться к администрации
АвтоРефераты
Главная страница