Получение и структурно-функциональный анализ актинопоринов мультигенных Hct-a и Hct-s семейств актинии Heteractis crispa


Скачать 173,3 Kb.
PDF просмотр
НазваниеПолучение и структурно-функциональный анализ актинопоринов мультигенных Hct-a и Hct-s семейств актинии Heteractis crispa
страница1/13
Ткачева Екатерина Сергеевна
Дата конвертации21.09.2012
Размер173,3 Kb.
ТипАвтореферат
СпециальностьБиохимия
Год2012
На соискание ученой степениКандидат биологических наук
  1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   13

 
 
 
На правах рукописи 
 
 
Ткачева Екатерина Сергеевна 
 
Получение и структурно-функциональный анализ 
актинопоринов мультигенных Hct-A и Hct-S семейств актинии 
Heteractis crispa 
 
 
 
 
03.01.04 – биохимия 
 
 
Автореферат  
диссертации на соискание ученой степени 
 кандидата биологических наук 
 
 
 
 
 
 
Владивосток  2012



Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки 
Тихоокеанском институте биоорганической химии им. Г.Б. Елякова ДВО РАН 
  
  
 Научный руководитель
д.х.н., профессор Козловская Эмма Павловна 
 
 
Официальные оппоненты:  
 
Костецкий Эдуард Яковлевич, 
д.б.н., профессор,  
Дальневосточный федеральный университет,  
зав. кафедрой биохимии, микробиологии и биотехнологии. 
 
Ковальчук Светлана Николаевна, к.б.н.,  
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки  
Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова ДВО РАН,  
с.н.с. лаборатории Морской биохимии. 
 
 
Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки 
Биолого-почвенный институт ДВО РАН, Владивосток  
 
 
Защита  состоится  «11»  мая  2012  г.  в  1000 часов  на  заседании  диссертационного 
совета  Д  005.005.01  при  Федеральном  государственном  бюджетном  учреждении 
науки Тихоокеанском институте биоорганической химии им. Г.Б. Елякова ДВО РАН 
по адресу: 690022, г. Владивосток, проспект 100 лет Владивостоку, 159, ТИБОХ ДВО 
РАН. Факс: (423)231-40-50, e-mail: dissovet@piboc.dvo.ru  
С  диссертацией  можно  ознакомиться  в  филиале  Центральной  научной 
библиотеки ДВО РАН (г. Владивосток, проспект 100 лет Владивостоку, 159, ТИБОХ 
ДВО РАН).  
Текст автореферата размещен на сайте www.piboc.dvo.ru  
 
 
Автореферат разослан «10» апреля 2012 г. 
 
 
 
 
Ученый секретарь 
диссертационного совета, 
к.б.н.                                                                                                             Черников О. В. 


ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ 
Актуальность  темы.  Актинопорины  –  белковые  цитолизины  (20  кДа), 
продуцируемые 
ядовитыми 
морскими 
кишечнополостными, 
актиниями, 
принадлежат  к  группе  α-пороформирующих  токсинов  (α-ПФТ)  (Parker  and  Feil, 
2005). Огромный интерес исследователей к этим белкам обусловлен наличием у них 
уникальной  пространственной  структуры    высоко  консервативного  фолда  β-
сэндвича  и  N-концевой  α-спирали,  способных  претерпевать  конформационные 
перестройки  при  переходе  белка  из  водорастворимого  в  мембраносвязанное 
состояние,  в  котором  он  осуществляет  свое  пороформирующее  действие.  С 
мембранолитическим  действием  связывают  широкий  спектр  биологической 
активности 
актинопоринов: 
противоопухолевой, 
кардиостимулирующей, 
дерматонекротической,  антипаразитарной  (Turk,  1991).  В  последние  годы  α-ПФТ 
актиний  используют  для  создания  потенциальных  фармакологических  агентов   
химерных молекул, представляющих собой иммуноконьюгаты актинопоринов (либо 
их  фрагментов,  например,  N-концевого  участка)  с  лигандами  (моноклональными 
антителами,  гормонами  или  факторами  роста)  (Tejuca  et  al.,  2009).  Действие  этих 
конъюгатов  направлено  на  биологические  мишени,  мембраны  опухолевых  и 
паразитарных клеток. α-ПФТ являются незаменимыми инструментами исследования 
структурной  организации  и  механизмов  функционирования  биологических  и 
модельных мембран (Чантурия и др., 1990; Shnyrov et al., 1992; Parker and Feil, 2005). 
Проявляемые актинопоринами фармакологические эффекты свидетельствуют о том, 
что эти белки связываются не только с липидными, но и с белковыми компонентами 
мембран,  интегринами,  посредством  RGD-мотива  (трипептида:  аргинин-глицин-
аспарагиновая 
кислота), 
что 
может 
быть 
использовано 
для 
получения 
противоопухолевых агентов нового поколения. 
Повышенный  интерес  к  изучению  взаимосвязи  структуры  и  функции 
актинопоринов  связан,  в  первую  очередь,  с  необходимостью  более  глубокого 
понимания  механизма  действия  этих  мембраноактивных  белков,  играющих  важную 
экологическую  и  алломональную  роль  в  морском  биоценозе.  Дальнейшего  изучения 
требует  также  феномен  мультигенности  актинопоринов,  обнаруженный  недавно  у 
актинии Heteractis magnifica (Wang et al., 2008). В настоящее время перспективным и 
актуальным  методом  исследования  является  сайт-направленный  мутагенез,  который 
позволяет выяснить ключевую роль аминокислотных остатков (а.о.) актинопоринов в 
функционально  значимых  участках  молекулы,  вовлеченных  в  различные  этапы 
порообразования  (N-концевой  α-спирализованный  фрагмент,  фосфорилхолиновый 
(РОС)-сайт связывания и RGD-мотив). 
Цель  и  задачи  исследования.  Целью  данной  работы  было  установление 
структурно-функциональных  взаимосвязей  представителей  мультигенных  семейств 
пороформирующих 
токсинов 
актинии 
Heteractis 
crispa. 
Для 
достижения 
поставленной цели необходимо было решить следующие задачи: 
(1)  выделить и идентифицировать нативные актинопорины; 
(2)  получить  нуклеотидные  последовательности  и  установить  на  их  основе 
аминокислотные последовательности актинопоринов семейств Hct-A и Hct-S; 
(3)  создать  генетические  конструкции  генов  актинопоринов  для  гетерологичной 
экспрессии в бактериальной системе и получить рекомбинантные белки; 
(4)  определить  физико-химические  характеристики  рекомбинантных  белков  и 
сравнить их с характеристиками нативных актинопоринов;  
(5)  выполнить  сайт-направленный  мутагенез  функционально  значимого  участка 
молекулы актинопорина  RGD-мотива; 
  1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   13

Разместите кнопку на своём сайте:
поделись


База данных защищена авторским правом ©dis.podelise.ru 2012
обратиться к администрации
АвтоРефераты
Главная страница