Особенности течения рака желудка в зависимости от морфологического строения опухоли


Скачать 373,29 Kb.
НазваниеОсобенности течения рака желудка в зависимости от морфологического строения опухоли
страница1/5
Степанов Иван Вадимович
Дата конвертации24.09.2012
Размер373,29 Kb.
ТипАвтореферат
СпециальностьОнкология 14.03.02- патологическая анатомия
Год2012
На соискание ученой степениКандидат медицинских наук
  1   2   3   4   5



На правах рукописи


Степанов Иван Вадимович


особенности течения рака желудка в зависимости

от морфологического строения опухоли


14.01.12 - онкология

14.03.02- патологическая анатомия




Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук


Томск – 2012

Работа выполнена в ГБОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России и ФГБУ «НИИ онкологии» СО РАМН



Научные руководители:

доктор медицинских наук, доцент

Завьялова Марина Викторовна





доктор медицинских наук

Афанасьев Сергей Геннадьевич














Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, ведущий научный сотрудник отделения опухолей головы и шеи ФГБУ «НИИ онкологии» СО РАМН

Новиков Валерий Александрович





доктор медицинских наук, профессор кафедры патологической анатомии ГБОУ ВПО НГМУ Минздравсоцразвития России

Надеев Александр Петрович



Ведущая организация: ФГБУ «Московский научно-исследовательский онкологический институт имени П.А. Герцена» Минздравсоцразвития России.




Защита диссертации состоится «____»_________________2012 г. в ____ часов на заседании диссертационного совета Д 001.032.01 при ФГБУ «НИИ онкологии» СО РАМН (634050, г. Томск, пер. Кооперативный, 5).


С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГБУ «НИИ онкологии» СО РАМН.


Автореферат разослан «____»________________2012 г.





Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор И.Г. Фролова

Общая характеристика работы

Актуальность исследования

Рак желудка (РЖ) является одним из наиболее часто встречающихся онкологических заболеваний, как в мире, так и в России (Ушакова И.В. 2010; Чиссов В.И. с соавт. 2011; Kwong M.F. et al., 2010; Jan Bornschein et al., 2011). Несмотря на наблюдающееся в последние десятилетия снижение заболеваемости РЖ, показатели летальности при этой патологии остаются высокими. В мировом масштабе по уровню заболеваемости РЖ переместился на 4-е место после рака легкого, молочной железы и колоректального рака, однако по показателям смертности он остается на 2-м месте (Мерабишвили В.М. с соавт., 2005; Чиссов В.И. с соавт., 2011).

В настоящее время критерии прогноза лимфогенной распространенности, во многом определяющей течение заболевания при РЖ, до конца не изучены. В клинической практике, в основном, приходится пользоваться такими параметрами, как размеры и локализация опухоли, степень ее дифференцировки, глубина инвазии, что не всегда позволяет надежно предсказать исход заболевания и адекватно определить лечебный алгоритм для пациентов, страдающих РЖ.

Из гистологических параметров прогноза при РЖ наибольшее значение придают делению опухолей на диффузный и кишечный типы рака (классификация Lauren, 1965). Считается, что диффузный тип рака желудка протекает более злокачественно, чаще встречается у лиц более молодого возраста и быстро метастазирует. В то же время, течение заболевания в пределах одного гистологического типа является достаточно неоднозначным (Никулин М.П. и соавт., 2006; Zheng H. et. al., 2007).

В настоящее время для прогноза течения рака желудка изучаются показатели пролиферативной активности, апоптоза, маркеры межклеточной адгезии, экспрессия HER2/neu и факторов ангиогенеза. Универсальным показателем пролиферативной активности является экспрессия Ki67 (Lazăr D. et al., 2010; Cletus A. Arciero et al., 2010; Sym S. et. al., 2011). В ряде исследований было показано, что повышение уровня экспрессии Ki67 коррелировало с наличием метастазов в лимфатических узлах.

Относительно новым подходом в комплексе иммуногистохимического исследования опухолей желудка является определение экспрессии CDX1 и CDX2. Полагают, что потеря экспрессии CDX2 может быть сигналом прогрессии опухоли в случаях раннего рака желудка и новообразований с кишечным фенотипом (Park D.Y. et al., 2009; Xie Y. et al., 2010; Kang J.M. et al., 2011; Rotkrua P. et al., 2011). Из показателей апоптоза большое внимание придается экспрессии p53, которая положительно коррелирует с размером, степенью дифференцировки и глубиной инвазии опухоли. Ряд исследователей сообщают, что положительная экспрессия p53 более характерна для кишечного типа рака желудка, чем для диффузного (Zheng H. et al., 2006; Wang L. et al., 2011).

В настоящее время актуальным является поиск новых, прогностически значимых маркеров при раке желудка. Одним из таких маркеров может являться AKR1B10 – НАД(Ф)-зависимая оксидоредуктаза, восстанавливающая карбонильные соединения (альдегиды и кетоны) до спиртов, что обусловливает ее важную роль в метаболизме ксенобиотиков (Fukumoto S., 2005). Есть сведения об участии AKR1B10 в метаболическом пути ретиноевой кислоты, которая регулирует дифференцировку и осуществляет рост-супрессивные эффекты в трансформированных клетках (von Lintig J., 2000). В литературе практически нет сведений о показателях экспрессии этого гена при РЖ, за исключением данных Gomez et al. (2005), которые на ограниченном числе образцов с использованием микрочипов показали снижение экспрессии гена AKR1B10 при кишечном типе рака желудка. Другим потенциально значимым маркером является циклофилин А, относящийся к семейству иммунофилинов и играющий важную роль в формировании компетентного фолдинга белков, хемотаксисе и сигнальной трансдукции. В последние годы было проведено множество исследований, которые выявили гиперэкспрессию циклофилина A в злокачественных опухолях различных локализаций (Zheng J., 2008; Han X., 2010; Yang J., 2011). Однако, точная роль CypА в канцерогенезе остается до конца не ясной.

Таким образом, в настоящее время существует значительное количество прогностических факторов при раке желудка. Однако их трактовка для оценки риска прогрессирования заболевания в большинстве случаев неоднозначна.


Цель исследования

Выявить прогностически значимые морфологические параметры первичной опухоли при диффузном и кишечном типах рака желудка, сопряженные с высоким риском лимфогенного метастазирования и неблагоприятным течением заболевания.


Задачи исследования

  1. Изучить морфологическое строение и экспрессионные характеристики первичной опухоли при диффузном и кишечном типах рака желудка.

  2. Исследовать частоту и выраженность лимфогенного метастазирования в зависимости от морфологического строения первичной опухоли при различных гистотипах рака желудка.

  3. Оценить взаимосвязь параметров лимфогенного метастазирования с особенностями экспрессии показателей апоптоза, пролиферативной активности, CDX2, AKR1B10 и циклофилина А в первичной опухоли при диффузном и кишечном типах рака желудка.

  4. Изучить влияние морфологического строения и иммуногистохимических характеристик первичной опухоли на частоту гематогенной диссеминации процесса и риск развития локорегионарных рецидивов.


Научная новизна

Впервые обнаружено, что различные морфологические и экспрессионные параметры новообразования при кишечном типе рака желудка связаны с прогрессированием заболевания, в то время как при диффузном типе рака желудка эти характеристики не сопряжены с диссеминацией опухолевого процесса.

Впервые установлено, что нарастание степени опухолевой инвазии в стенку желудка сопровождается уменьшением экспрессионных параметров новообразования, причем в большей степени этот феномен наблюдается при кишечной форме рака желудка.

Впервые показано, что только при кишечном типе рака желудка частота развития лимфогенных метастазов зависит от глубины инвазии опухоли, а также от наличия ретракции стромы вокруг опухолевых структур. При диффузной форме рака желудка подобной взаимосвязи не выявлено. При этом прогностическое значение имеет инвазия только низкодифференцированными группами клеток.

Впервые обнаружено, что сохранение способности опухолевых элементов рака желудка кишечного типа экспрессировать AKR1B10 при глубокой инвазии в стенку желудка, сопряжено с большим риском развития гематогенных метастазов.


Практическая значимость

Полученные результаты свидетельствуют о существенных различиях в механизмах инвазивного роста и лимфогенного метастазирования при кишечном и диффузном типах рака желудка. Взаимосвязь прогрессирования опухолевого процесса с морфологическими и иммунофенотипическими особенностями первичного новообразования прослеживается только при кишечном типе рака желудка. Определены наиболее прогностически значимые патоморфологические и иммуногистохимические факторы риска развития лимфогенных и гематогенных метастазов рака желудка.

Результаты, полученные в ходе проведенного исследования, внедрены в клиническую практику отделения патологической анатомии и цитологии ФГБУ «НИИ онкологии» СО РАМН и используются при чтении лекционного курса и проведении практических занятий на кафедре патологической анатомии ГБОУ ВПО «СибГМУ» Минздравсоцразвития России.



Положения, выносимые на защиту

  1. По мере нарастания глубины инвазии происходит снижение экспрессионной способности опухолевых элементов, более характерное для кишечного, но не для диффузного гистотипа рака желудка.

  2. Только для кишечного типа рака желудка характерна связь частоты и выраженности лимфогенного метастазирования с морфологическими параметрами первичной опухоли и глубиной инвазии в стенку органа.

  3. Гематогенное метастазирование при раке желудка кишечного типа ассоциировано с сохранением способности клеток, инфильтрирующих глубокие слои стенки желудка, экспрессировать адаптивный фермент AKR1B10.


Апробация работы

Основные положения диссертации докладывались и обсуждались на V региональной конференции молодых ученых им. академика РАМН Н.В. Васильева «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии» (Томск, 2010); на международном конгрессе, посвящённом 90-летию со дня рождения М.З. Сигала «Диагностика и лечение онкологических заболеваний пищеварительной системы» (Казань, 2010); VI съезде онкологов и радиологов стран СНГ (Душанбе, 2010); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 65-летию Красноярского края (Красноярск, 2010); VI региональной конференции молодых ученых им. академика РАМН Н.В. Васильева «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии» (Томск, 2011).


Публикации

По теме диссертационной работы опубликовано 11 печатных работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 134 страницах машинописного текста, включает введение, обзор литературы, главы о материалах и методах исследования, результатах собственных исследований, заключение, выводы, практические рекомендации. Работа иллюстрирована 76 таблицами и 18 рисунками. Список литературы содержит 190 источников, из них 29 отечественных и 161 зарубежных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ


В исследование были включены 107 больных раком желудка в возрасте от 31 до 82 лет, (средний возраст – 58,5±10,7 года), находившихся на лечении в отделении торако-абдоминальной онкологии НИИ онкологии СО РАМН с 2003 по 2009 гг. Распределение больных по полу – 57 (53%) мужчин, 50 (47%) женщин. Распространенность заболевания определялась согласно международной классификации по системе TNM (2010 г.): у 26 (24%) пациентов была IA стадия, у 20 (19%) – IB стадия, у 23 (21%) – IIА стадия, у 18 – IIB стадия (17%), у 18 (17%) – IIIА стадия, у 2 (2%) – IIIB стадия заболевания. По малой кривизне желудка опухоли располагались у 49 (46%) больных, в теле желудка – у 21 (19%), в антральном отделе – у 20 (18%), в пилорическом – у 7 (7%), по большой кривизне –у 6 (6%), в кардиальном отделе – у 4 (4%).

Во всех случаях до операции была получена морфологическая верификация диагноза и не проводилась неоадъювантная химиотерапия. Во всех случаях было выполнено радикальное оперативное вмешательство: 66 (61,7%) больным осуществлена субтотальная дистальная резекция желудка, 38 (35,6%) – гастрэктомия, 1 (0,9%) – проксимальная резекция желудка, 1 (0,9%) – панкреато-дуоденальная резекция, 1 (0,9%) – операция Льюиса. Сроки наблюдения за больными составили 3 года. Анализировались первичные документы – истории болезни и амбулаторные карты больных.

После получения операционного материала проводилась макроскопическая оценка и вырезка первичной опухоли, слизистой оболочки желудка на отдалении от опухолевого узла и всех регионарных лимфатических узлов. Взятые образцы тканей помещались в нейтральный формалин. Материал проводился по стандартной методике и заливался в парафин. Срезы толщиной 5-6 мкм окрашивались гематоксилином и эозином. Морфологическое исследование проводилось с помощью светового микроскопа фирмы «ЛОМО МИКМЕД-2». Оценивалась ткань первичной опухоли и все удаленные лимфатические узлы. Гистологический тип рака желудка (кишечный, диффузный, смешанный) устанавливался согласно классификации Lauren (Lauren P., 1965).

В паренхиматозном компоненте опухолей диффузного и кишечного типов выделялись железистоподобные, трабекулярные, солидные, криброзные структуры и дискретно расположенные группы опухолевых клеток, отмечалось наличие перстневидных клеток. Оценивалась глубина инвазии опухоли по отношению к толще стенки желудка разными типами опухолевых структур. Учитывалась митотическая активность клеток, строящих разные структуры паренхиматозного компонента опухоли, при этом в каждой из структур оценивались митозы в 10 полях зрения при увеличении ×400. В регионарных лимфатических узлах определялось наличие метастатического поражения.

Иммуногистохимическое исследование проводилось по стандартной методике. Для расправления срезов стекла со срезами помещались на 30 минут в термостат при 56ºС. Для демаскировки использовался буфер комнатной температуры, которым заполнялись демаскировочные контейнеры (2 шт.) по 200 мл буфера в каждом.

Промывочный фосфатный буфер и рабочее разведение антитела готовились в день исследования. Для депарафинизации срезов стекла помещались в ксилол (температура 39ºС) – 3 порции по 10 минут. Затем, стекла со срезами проводились по спиртам (96º) – 3 порции по 5 минут и помещались в дистиллированную воду на 5 минут. Прогревалась микроволновая печь (устанавливался контейнер с дистиллированной водой (200 мл) внутрь печи и нагревался 5 минут при 60% мощности печи). Выходная мощность микроволновой печи составляла 800 Вт. Стекла фиксировались в соответствующих держателях и перемещались в контейнеры для демаскировки антигенов с цитратным буфером (рН=6,0). Контейнеры ставились внутрь микроволновой печи в центр, на расстоянии 2 см друг от друга. Микроволновая печь включалась на 5 мин при 60% от полной мощности. Далее, на 1 минуту оставляли печь с открытой дверцей, затем, продолжали нагрев при 30% от полной мощности печи еще 14 минут. Контейнеры оставляли остывать в течение 30 минут. Стекла из контейнеров для демаскировки переносили в держатели для стекол, находящиеся в промывочном фосфатном буфере, промывали в 2 порциях по 5 минут. Срезы обводили гидрофобным карандашом и на 5 минут наносили реагент блокирующий эндогенную пероксидазную активность (Peroxidase blocking reagent фирмы «Dako»). Стекла со срезами помещали в 1 порцию дистиллированной воды на 5 минут, затем промывали в 1 порции фосфатного буфера в течение 5 минут. Первичные/специфичные антитела наносили на 15 минут, при температуре 25ºС. Стекла со срезами промывали в 2 порциях промывочного фосфатного буфера по 5 минут. Затем наносилась визуализирующая система. Использовалась полимерная система визуализации производства фирмы «BioGenex», состоящая из усилителя сигнала (Super Enhancer), наносимого первым компонентом системы на 20 минут при температуре 25ºС, после чего стекла со срезами промывали в 2 порциях промывочного фосфатного буфера по 5 минут. Затем, на 30 минут наносился второй компонент системы визуализации - полимер (S-S Polymer) при температуре 25ºС. Стекла со срезами промывались в 2 порциях промывочного фосфатного буфера по 5 минут. Далее, наносился раствор ДАБа (диаминобензидина). Использовался жидкий ДАБ производства фирмы “Dako”, который готовился непосредственно перед применением. К 1 мл ДАБ-буфера добавлялась 1 капля ДАБ-хромогена, входящего в состав набора «Dako», смесь наносилась на 5 минут, контроль хода реакции проводился под микроскопом. Стекла со срезами промывались в течение 10 минут в водопроводной воде. Срезы докрашивались гематоксилином в течение 6 секунд, затем помещались в водопроводную воду на 10 минут. Стекла со срезами проводились по спиртам (96º) в 3 порциях по 5 минут. Затем по толуолу в 3 порциях по 5 минут. Далее срезы заключались в канадский бальзам и маркировались согласно протоколу.

При исследовании применялись антитела фирмы «Dako» к Ki67 (клон MIB-1, RTU, мышиные), фирмы «Novocastra» к р53 (клон CM1, рабочее разведение 1:150), к bcl2 (клон bcl2/100/D5, рабочее разведение 1:80), к CDX2 (клон АМТ28, рабочее разведение 1:100), к PPIA (циклофилин А) (рабочее разведение 1:1200), к MUC2 (клон FPM513, RTU, мышиные), к MUC5 (клон FPM488, RTU, мышиные). Для детекции экспрессии белка AKR1B10 использовались высокоаффинные моноклональные антитела, полученные в институте молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН (НОУ-ХАУ, Протокол № 02.445.11.7354-4 от 25 марта 2008 г.). Чувствительность антител в дот-блоте составила 100 пкг, в Вестерн-блоте – 100 пкг. Использовалось рабочее разведение антител 1:300.

Экспрессия Ki67, bcl2, р53, CDX2, AKR1B10, PPIA оценивалась по процентному содержанию положительно окрашенных клеток в каждом варианте структур паренхиматозного компонента первичной опухоли на различной глубине инвазии. Учитывалась интенсивность экспрессии AKR1B10 и PPIA (циклофилин А) в баллах: 1 балл – слабая, 2 балла – умеренная, 3 балла выраженная.

Обработка полученных данных выполнялась с использованием пакета программ «Statistica 6.0». Применялся дисперсионный, корреляционный анализ по Спирмену, критерий χ2, метод логистической регрессии. Обсуждаются результаты с достоверностью различий при р<0,05 и с тенденцией различий при р<0,1.


РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
  1   2   3   4   5

Разместите кнопку на своём сайте:
поделись


База данных защищена авторским правом ©dis.podelise.ru 2012
обратиться к администрации
АвтоРефераты
Главная страница